如何正確使用熒光分光光度計是一個很重要的問題
更新時間：2021-05-17 點擊次數(shù)：1410次
如何使用熒光分光光度計是一個很重要的問題，那么今天就讓我們一起來了解一下具體該如何使用吧。
一、硬件操作
熒光分光光度計在使用時，需要注意開機次序，以保護設備之間不受影響。熒光光譜儀開機順序一般為先開氙燈，然后開儀器主機，最后開跟儀器連接的計算機。 如此操作的原因在于穩(wěn)態(tài)氙燈是高壓點亮，為了避免瞬問脈沖電流對周圍設備造成影響，需要先開氙燈，等電流穩(wěn)定后再打開周邊的電腦等設備。關機順序則相反。
二、軟件操作
熒光定量分析多采用工作曲線法，即以已知量的標準物質(zhì)，按試樣相同方法處理后，配成一系列標準溶液，測定其相對熒光強度和空白溶液的相對熒光強度;
扣除空白值后，以熒光強度為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，繪制工作曲線;然后將處理后的試樣配成一定濃度的溶液，在同一條件下測定其相對熒光強度，扣除空白值后，從工作曲線上求出熒光物質(zhì)的含量。
在用熒光分析法測定某些會引起熒光改變的微量物質(zhì)時，常采用差示熒光法，可使熒光強度的讀數(shù)差距拉大，使熒光強度的降低加大，從而提高方法的靈敏度和準確度。
下面以日立F-4500熒光分光光度計的使用為例，具體介紹如何在儀器上進圖譜掃描、濃度分析等定性、定量測試操作。
1.圖譜掃描(WavelengthScarl)簡明操作：
①打開光譜儀電源開關(POwER)，5s后再按下氙燈點燈按鈕，當氙燈點燃后，再接通主開關(MAIN)。此時主開關上方綠色指示燈連續(xù)閃動三下，然后開計算機、顯示器、打印機。計算機進入操作系統(tǒng)。
②運行FL-Solution控制軟件。
③建立試驗方法(發(fā)射光譜)，設置測量參數(shù)：點擊快捷欄“Method”后，立即顯示了分析方法(AnalysisMethod)的五個重疊界面，分別為“常規(guī)”(Gen—eral)、“儀器條件”(Instnlinent)、“模擬畫面”(Mmlitor)、“處理”(Processing)、“報告”(Report)。
下面詳細介紹每個界面：單擊“常規(guī)”按鈕，測量方式選擇波長掃描Wave一1ength);單擊“儀器條件”按鈕，掃描方式選為發(fā)射波長掃描。
激發(fā)波長的輸入范圍為200～900nm，發(fā)射起始波長的輸入范圍200～890nm，發(fā)射終止波長的輸入范圍210～900nm。選定合適的掃描速度、延遲時間、發(fā)射單元狹縫、光電倍增管負高壓，設置發(fā)射單元狹縫、響應速度、重復次數(shù)等參數(shù)。
④進行樣品掃描：將待測樣品倒人四面通光的石英比色皿中，并將其放入儀器的樣品架中。點擊測量按鈕，儀器便開始對樣品進行掃描測量。
⑤存儲掃描譜圖：在文件菜單“另存為”，輸入文件名，按“保存”將數(shù)據(jù)保存。
⑥打印譜圖：打印樣品掃描譜圖。
⑦測試結束，將比色皿取出，清洗，晾干。退出軟件，關閉計算機，在軟件上將氙燈熄滅，待其冷卻到室溫時才關光譜儀主機。
注意：測試結束不要急于關閉光譜儀主機電源。務必等到氙燈冷卻后，才關光譜儀主機。可以將手放在儀器主機上面左側的散熱窗口處，感受其溫度，直到其溫度降到室溫時，才能關閉光譜儀主機。
