如何正確使用熒光分光光度計(jì)是一個(gè)很重要的問題
更新時(shí)間：2021-05-17 點(diǎn)擊次數(shù)：1241次
如何使用熒光分光光度計(jì)是一個(gè)很重要的問題，那么今天就讓我們一起來了解一下具體該如何使用吧。
一、硬件操作
熒光分光光度計(jì)在使用時(shí)，需要注意開機(jī)次序，以保護(hù)設(shè)備之間不受影響。熒光光譜儀開機(jī)順序一般為先開氙燈，然后開儀器主機(jī)，最后開跟儀器連接的計(jì)算機(jī)。 如此操作的原因在于穩(wěn)態(tài)氙燈是高壓點(diǎn)亮，為了避免瞬問脈沖電流對(duì)周圍設(shè)備造成影響，需要先開氙燈，等電流穩(wěn)定后再打開周邊的電腦等設(shè)備。關(guān)機(jī)順序則相反。
二、軟件操作
熒光定量分析多采用工作曲線法，即以已知量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按試樣相同方法處理后，配成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定其相對(duì)熒光強(qiáng)度和空白溶液的相對(duì)熒光強(qiáng)度;
扣除空白值后，以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線;然后將處理后的試樣配成一定濃度的溶液，在同一條件下測(cè)定其相對(duì)熒光強(qiáng)度，扣除空白值后，從工作曲線上求出熒光物質(zhì)的含量。
在用熒光分析法測(cè)定某些會(huì)引起熒光改變的微量物質(zhì)時(shí)，常采用差示熒光法，可使熒光強(qiáng)度的讀數(shù)差距拉大，使熒光強(qiáng)度的降低加大，從而提高方法的靈敏度和準(zhǔn)確度。
下面以日立F-4500熒光分光光度計(jì)的使用為例，具體介紹如何在儀器上進(jìn)圖譜掃描、濃度分析等定性、定量測(cè)試操作。
1.圖譜掃描(WavelengthScarl)簡明操作：
①打開光譜儀電源開關(guān)(POwER)，5s后再按下氙燈點(diǎn)燈按鈕，當(dāng)氙燈點(diǎn)燃后，再接通主開關(guān)(MAIN)。此時(shí)主開關(guān)上方綠色指示燈連續(xù)閃動(dòng)三下，然后開計(jì)算機(jī)、顯示器、打印機(jī)。計(jì)算機(jī)進(jìn)入操作系統(tǒng)。
②運(yùn)行FL-Solution控制軟件。
③建立試驗(yàn)方法(發(fā)射光譜)，設(shè)置測(cè)量參數(shù)：點(diǎn)擊快捷欄“Method”后，立即顯示了分析方法(AnalysisMethod)的五個(gè)重疊界面，分別為“常規(guī)”(Gen—eral)、“儀器條件”(Instnlinent)、“模擬畫面”(Mmlitor)、“處理”(Processing)、“報(bào)告”(Report)。
下面詳細(xì)介紹每個(gè)界面：單擊“常規(guī)”按鈕，測(cè)量方式選擇波長掃描Wave一1ength);單擊“儀器條件”按鈕，掃描方式選為發(fā)射波長掃描。
激發(fā)波長的輸入范圍為200～900nm，發(fā)射起始波長的輸入范圍200～890nm，發(fā)射終止波長的輸入范圍210～900nm。選定合適的掃描速度、延遲時(shí)間、發(fā)射單元狹縫、光電倍增管負(fù)高壓，設(shè)置發(fā)射單元狹縫、響應(yīng)速度、重復(fù)次數(shù)等參數(shù)。
④進(jìn)行樣品掃描：將待測(cè)樣品倒人四面通光的石英比色皿中，并將其放入儀器的樣品架中。點(diǎn)擊測(cè)量按鈕，儀器便開始對(duì)樣品進(jìn)行掃描測(cè)量。
⑤存儲(chǔ)掃描譜圖：在文件菜單“另存為”，輸入文件名，按“保存”將數(shù)據(jù)保存。
⑥打印譜圖：打印樣品掃描譜圖。
⑦測(cè)試結(jié)束，將比色皿取出，清洗，晾干。退出軟件，關(guān)閉計(jì)算機(jī)，在軟件上將氙燈熄滅，待其冷卻到室溫時(shí)才關(guān)光譜儀主機(jī)。
注意：測(cè)試結(jié)束不要急于關(guān)閉光譜儀主機(jī)電源。務(wù)必等到氙燈冷卻后，才關(guān)光譜儀主機(jī)。可以將手放在儀器主機(jī)上面左側(cè)的散熱窗口處，感受其溫度，直到其溫度降到室溫時(shí)，才能關(guān)閉光譜儀主機(jī)。
